紫苏FAD3基因RNA干扰载体的构建及遗传转化

本研究利用RNA干扰的方法抑制紫苏ω-3脂肪酸脱氢酶基因FAD3的表达，以期得到低ALA含量的转基因植株。根据紫苏FAD3基因(GenBank登录号为KC990786.1)序列设计含有不同酶切位点的特异性扩增引物，通过扩增获得长度为258 bp的RNA干扰片段，构建以CaMV35S启动子驱动表达的紫苏FAD3基因RNA干扰表达载体pFGC5941M-FAD3I，将该载体转入根癌农杆菌GV2301后，采用农杆菌介导法进行紫苏的遗传转化，经除草剂抗性筛选和PCR检测获得1株阳性转基因植株。利用荧光定量PCR技术对野生型和转基因阳性苗的FAD3基因进行了表达分析，结果显示，阳性植株中FAD3基因的表达受到显著抑制，FAD3基因表达量降低了80%，说明此研究构建的FAD3基因RNA干扰载体对该基因表达沉默是有效的，为FAD3基因在不饱和脂肪酸代谢过程中的功能研究提供了理论依据。