E8基因与甜蛋白des-pGlu1-Brazzein双价植物表达载体的构建及对人参果的遗传转化

本研究通过对茄科植物的E8基因的非编码区DNA序列进行亲缘关系及功能元件保守性分析，发现E8基因的非编码区包含ERE，茉莉酸和低温干旱应答等基序并存在较高的保守性，表明利用果实特异性E8启动子改善同属茄科茄属的人参果果实风味更具特异性；利用密码子偏爱性优化设计甜蛋白Brazzein，采用亚克隆技术成功获得甜蛋白des-pGlu1-Brazzein基因和E8启动子基因，经Blast对比均与GenBank中已报道的序列高度同源，并利用2KGQ模型分析des-pGlu1-Brazzein基因的空间结构特性；以中间载体pHANNIBAL及植物表达载体pCEPSP为基础，分别构建由E8启动子及35S启动子驱动的兼具重组甜蛋白及除草剂抗性的植物表达载体，并通过农杆菌介导法进行人参果的遗传转化，获得转化再生植株54株，经检测从中筛选出15株阳性植株，初步确定已经完成目的基因整合到人参果基因组中。