拟南芥SAT1蛋白的原核表达及抗体制备

本研究构建了带有His标签的拟南芥 (Arabidopsis thaliana) SAT1基因原核表达载体pET-30b(+)-SAT1-His（6）。采用了能够降低目的蛋白背景表达水平的大肠杆菌 (Escherichia coli BL21(DE3) pLysS) 诱导表达体系，将超声波破碎细胞，His-trip柱纯化，咪唑洗脱并用Millipore公司的超滤管去盐浓缩后的SAT1融合蛋白，经免疫兔子，成功制备了SAT1蛋白多克隆抗体，并通过Western blotting检验其灵敏性。结果表明，成功构建的拟南芥SAT1原核表达载体，在E. coli中以0.1 mmol/L 异丙基-β-D-硫代半乳糖苷 (IPTG) 30℃诱导表达6 h后，融合蛋白得到较高水平，并能用250 mmol/L的咪唑从His-trip吸附柱中洗脱，所制备的多克隆抗体具有较高特异性和灵敏性，可用来检测转AtSAT1基因的转基因玉米株系中SAT1蛋白的积累量。