水稻细胞色素P450基因家族成员CYP81A6基因RNAi载体构建

水稻P450基因家族成员CYP81A6参与稻瘟病抗性反应，为了深入研究该基因的功能，本研究利用3次克隆的策略构建了该基因的RNAi载体。首先设计带有酶切位点的基因特异性引物，以cDNA为模板扩增3’非翻译区的特异片断，将目的产物连接到T载体上，经菌落PCR和酶切鉴定后进行测序。测序结果表示，目的片断已正确克隆到T载体上。然后利用双酶切通过2次亚克隆将目的片断以反向重复克隆到RNAi载体ds1301，通过分子检测表明，CYP81A6的RNAi载体构建成功，有助于后续的基因功能和作用机理的研究。