拟南芥未知基因At018融合蛋白原核表达条件的优化及纯化

本课题组在前期的研究中利用AlCl3胁迫筛选碱茅全长cDNAs酵母表达文库获得到一个与铝毒害相关的未知基因(基因编号为018, 用put018表示)，该基因与拟南芥中未知基因(基因号为At5g57345, 本研究中用At018表示)有较高的同源性。为了获得At018的纯化蛋白，本研究将拟南芥At018基因克隆后构建原核表达载体pGEX-6p-3-At018，再将其转入大肠杆菌BL21 (DE3)菌株，利用异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)进行诱导表达。同时运用传统方法优化诱导条件，以提高重组融合蛋白的表达效率。SDS-PAGE分析结果表明，30℃下0.1 mmol/L IPTG的条件下诱导3 h后，GST-At018融合蛋白的表达量最大，蛋白分子质量与预测值相符，该蛋白主要以可溶性形式存在；接着利用Glutathione Sepharose4 Fast Flow亲核层析树脂纯化最终获得GST-At018融合蛋白。本研究可为进一步进行At018的功能解析提供基础。