种子检验学考试要点2（农学门类）

原文地址：种子检验学考试要点2（农学门类）作者：王委员长

1. 四唑染色

（1）测定原理:有生活力的种子活细胞在呼吸过程中都会发生氧化还原反应。四唑溶液（无色）被种子活组织吸收后，参与活细胞的还原反应，从脱氢酶接受氢离子，被还原成红色、稳定、不扩散、不溶于水的三苯基甲臜；

DPNH2 + TTC → DPN + TTCH + HCl

(辅酶IH2) (四唑) (辅酶I) (甲臜) (氯化氢)

(2)测定方法

<1>试验样品 从净度分析后并经充分混合的净种子中，随机数取100粒种子，4次重复。如果是测定发芽试验末期休眠种子的生活力，则单用发芽试验末期所发现的休眠种子。

<2>染色前的种子准备（预湿、预措）:1)种子预湿(方法：①快速水浸预湿：适用于直接浸入水中不会造成组织破裂损伤，不会影响鉴定正确性的种子；②缓慢纸床预湿：适用于直接浸在水中容易破裂和损伤的种子，以及衰弱的种子或过分干燥的种子；③H2O2溶液浸种：为加快种子吸胀、促进酶的活化，缩短预湿时间。 ) 2)染色前的种子处理(预措):(方法：①刺穿：对经过预湿的种子或硬实种子，可利用解剖针或解剖刀，刺穿种子的非主要部位，适用于小粒牧草等种子。②纵切：通过胚中轴和胚乳，纵向切开，使胚的主要构造暴露出来，适用于具有直立胚的大粒禾本科等种子。③横切：用解剖刀、刀片、弯曲剪子或其他适当的方法，沿种子非主要组织横向切断。)

(3)染色程序：将准备好的100×4种子放入适宜大小的培养皿或烧杯中。加入适宜浓度的四唑溶液，以淹没种子为度，移置到一定温度的（黑暗或弱光）恒温箱内进行染色反应。

(4)一般鉴定原则:<1>凡是胚的主要构造及有关活营养组织染成有光泽的鲜红色，且组织状态正常的，为有生活力种子。<2>凡是胚的主要构造局部不染色或染成异常的颜色和光泽，并且活营养组织不染色部分已超过1/2，或超过允许范围以及组织软化的，为不正常种子。<3> 凡是完全不染色或染成无光泽的淡红色或灰白色，且组织已软腐或异常、虫蛀、损伤、腐烂的为死种子。

2. 离体胚测定的原理：将离体胚在规定的条件下培养5~10d有生活力的胚仍然保持坚硬新鲜的状态，或者吸水膨胀、子叶展开转绿，或者胚根和侧根伸长、长出上胚轴和第1叶；无生活力的胚，则呈现腐烂的症状

3. 染料染色法测定原理:活细胞原生质膜具有选择透性，染料大分子不能进入活细胞内，胚部等活组织不能被染料染色；死的种胚细胞因原生质膜丧失选择吸收能力，故可被染料染色

4. 种子活力：决定种子或种子批在发芽和出苗期间的活性水平和行为的那些种子特性的综合表现。

5. 种子活力、种子生活力、种子发芽力三者之间的关系：（1）高活力的种子一定具有高的发芽力和生活力（2）具有高发芽力的种子也必定具有高的生活力（3）具有生活力的种子不一定都具发芽力，能发芽的种子活力也不一定高。

6. 发芽测定法（3类）:(1)标准发芽试验（发芽速率测定）法(最古老和最为简单的方法，适用于各种作物。)（2)幼苗生长量测定法：适用于具有直立胚芽或胚根的禾谷类和蔬菜种子，采用纸卷直立发芽法。（3）幼苗评定试验：对大粒豆类种子，细弱苗也可达到相当的长度，不能用幼苗长度表示活力，采用标准发芽试验方法，幼苗评定时分成不同等级。

7. 电导率测定：（1）测定原理：种子吸胀初期，细胞膜重建和修复能力影响电解质（如氨基酸、有机酸、糖及其他离子）渗出程度，膜完整性修复速度越快，渗出物越少。高活力种子能够更加快速地重建膜，且最大限度修复任何损伤； 高活力种子浸泡液的电导率低于低活力种子。（2）测定方法：取50粒种子称重（精确至2位小数）2个重复。 取烧杯3个，用热水和去离子水洗净。将种子放入烧杯中，加入250ml去离子水，另一烧杯内加去离子水作对照。所有烧杯于20℃条件下放置24h，用电导仪测定浸泡液和对照的电导率。

8. 种子真实性：指一批种子所属品种、种或属与文件描述(品种证书、标签等)是否相同。即种子样品的真假。

9. 品种纯度：品种个体之间在特征、特性方面典型一致的程度，用本品种的种子数占供检样品种子数的百分率表示。即品种一致性程度的高低。

10. 品种真实性和纯度鉴定的方法分类

（1）根据其所依据的原理不同主要可分为：1）形态鉴定：籽粒、种苗、植株形态测定；2）物理化学法鉴定：荧光鉴定法、煮沸法；苯酚染色法、碘化钾染色法；3）生理生化法鉴定：愈创木酚染色法、电泳法、色谱法、免疫技术；4）分子生物学方法鉴定：分子标记技术；5）细胞学鉴定：染色体数目

（2）依据检验的对象分：1）种子纯度测定2）幼苗纯度测定3）植株纯度测定

（3）根据检验的场所分：1）田间纯度检验2）室内纯度检验3）田间小区种植检验

11. 苯酚（石炭酸）染色法

（1）染色原理：由于每个品种皮壳内酚酶活性不同，将苯酚氧化呈现深浅不同的褐色。

（2）适用范围：小麦、水稻和燕麦、大麦、黑麦草、早熟禾等牧草种子。

12. 愈创木酚法原理：大豆种皮内具有过氧化物酶，能使过氧化氢分解而放出氧，使愈创木酚氧化而产生红棕色的4-邻甲氧基醌。

13. 应用电泳鉴定品种的理论基础：电泳基础带电颗粒在电场作用下向与其电性相反方向的电极移动的现象称电泳。蛋白质带有电荷，因此在电场中能泳动。品种鉴定中，个体或群体间酶及蛋白质成分的差异，反映基因表达的差异。电泳技术可非常准确地分析种子蛋白质或同工酶的差异，进而区分不同品种

14. 种子纯度电泳检测的一般程序：（1）样品的提取；（2）凝胶的制备（3）加样电泳（4）染色（5）谱带分析

15. 田间检验：在种子生产过程 中，在田间对品种真实性进行验证，对品种纯度进行鉴定，对作物生长状况、病虫危害、异作物和杂草等情况进行调查，并确定其与特定要求符合程度的活动（种子能否作为种用）。一般由地方种子检验部门负责。

16. 田间检验时期：种子田在生长季节可以检查多次，通常为苗期、花期、成熟期，至少应在品种特征、特性表现最充分、最明显的时期检查一次。常规作物通常在成熟期；杂交作物在花期或花药开裂前；蔬菜作物则在食用器官成熟期

17. 田间检验方法（程序）：

（1）取样1）了解情况: <1>了解种子田基本情况<2>检查隔离情况<3>检查种子田总体状况;2）划分检验区 ;3）设点

（2）检验：边设点边检验，（根据品种特征特性）逐株观察

（3）结果与报告

18. 种子水分（种子含水量）:指种子中所有自由水与束缚水的总量占种子总重量的百分率。

19. 种子水分测定的意义: (1)保证种子安全贮藏(2)种子水分是种子分级的主要（四大）指标之一(3)节约贮运费用（体积、重量）

20. 种子水分测定的方法:

(1) 标准测定方法：烘干减重法:样品烘干后失去水分的重量计算种子水分百分率。

(2) 其他方法：1)（卡尔－费休）滴定法：适用于微量水份的测定。2)（甲苯）蒸馏法：适用于含挥发性物质的样品。3)快速法（电容式、电阻式和红外线水分测定仪）。

21. 标准测定法：

（1）低恒温烘干法(标准：103℃、8h，一次烘干)：适用种类－－所有农业、园艺和牧草种子。特别是油料作物种子（油分易于氧化而挥发而降低样品重量）必须采用此法。葱属、花生、芸苔属、辣椒、大豆、棉属、向日葵、萝卜、蓖麻、芝麻、茄子、所有林木种类等。

（2）高恒温烘干法(标准：130℃、1h)：适用种类：除油料作物以外的种子。禾谷类、豆类、禾本科牧草、豆科牧草、芹菜、胡萝卜、茼蓠、石刁梢、甜菜、西瓜、黄瓜、莴苣、番茄、菠菜、大麻、烟草等。

（3）（高水分种子）预先（二次）烘干法: 适用种类－－需要磨碎的高水分种子。禾谷类种子水分超过18%，豆类和油料作物水分超过16%时，必须采用预先烘干法。

22. 电阻式水分速测仪测定原理：在一闭合电路中，当电压一定时，电流强度与电阻成反比(欧姆定律I=U/R)。把种子作为电阻接入电路中，电流随种子自由水含量的高低而变化。把电表的刻度转换成相应水分的刻度。电容式水分速测仪测定原理。电容是表示导体容纳电量的物理量。电容量的大小与物质的介电常数（ξ ）和两极板对应面积（s）成正比，与两极间的距离（ d）成反比。当两极板的距离一定，测试的样品量一定（即两极的对应面积一定）时，电容量的变化只与介电常数变化有关。空气的介电常数为1，种子干物质为10，水为81，因此种子内水分变化，就会引起介电常数的变化，从而引起电容的变化。 若将种子放在电路中，作为电容的一个组成部分，测得电容的大小就可间接测得水分含量。

23. 甲苯蒸馏法测定原理：甲苯为有机溶剂，不溶于水，沸点为110.5℃， 相对密度为0.867，当其与样品共沸时，水分首先蒸发，同时也伴有甲苯蒸发，经冷凝滴入测量管中。由于甲苯不溶于水，且相对密度较水小，二者共存时有明显的界面，蒸馏完毕，可测出水的体积。根据水分体积和样品重量，计算样品的含水量。

24. 种子健康检验：对种子所携带病（真菌、细菌及病毒）虫（线虫及害虫）害种类及数量进行检验。（表示方法 ：种子带病率 ；种子虫害率。）

25. 种子病原物的检验方法：（1）肉眼检验（2）过筛检验（3）洗涤检验（4）漏斗分离检验（5）萌芽检验（6）分离培养检验（7）噬菌体检验（8）接种指示植物法（9）血清学检验（10）隔离种植检验

26. 种子害虫的检验方法：（1）肉眼检验（2）过筛检验（3）剖粒检验（4）染色检验（5）相对密度检验

27. 种子质量评定：对种子的品种品质和播种品质检验得到的结果与现行有效规定的最低标准或与标签（发票、合同、协议、检验报告单、广告目录等）标注进行比较，并给出相应结论的过程。

28. 种子质量评定的依据和原则

（1）种子质量评定的依据：1）国家标准：2）行业标准：3）地方标准： 4）企业标准：

（2）种子质量评定的原则：1）品种品质评定的一般原则 品种品质的优劣取决于品种的真实性和一致性。同一批种子当田间和室内纯度检验结果不一致时，应以纯度低的为准。若田间品种纯度过低，达不到国家分级标准的最低指标时，应严格去杂，经检验合格后作为种用，否则不能作为种用。若室内纯度低于国家分级标准最低指标时，绝不能作种用。

2）杂交种品种品质的评定：察看亲本纯度、制种田的隔离条件是否符合制种要求。田间杂株（穗）率（父本杂株散粉率、母本杂株率及母本散粉率）在分级指标内

29. 国外种子质量分级标准的特点：（1）品种纯度的大多数指标侧重于过程控制的指标，很少规定最终产品的指标（因为最终产品指标在短期内无法鉴定），标准容易实施。（2）品种纯度指标与室内检测指标（净度、发芽率）分开（因为像预基础种子、基础种子没有发芽率规定的约束，可以较低）切合种子繁殖的实际情况。（3）国际规定的品种纯度的指标都比较高，且与前作、隔离条件、亲本种子质量等结合起来使用。（4）种子的物理质量（如净度、发芽率等）（OECD）没有规定具体的标准，只规定必须满足进口国的最低标准

30. 国际种子检验证书包括种子批证书①橙色国际种子批证书②绿色国际种子批证书、种子样品证书③蓝色国际种子样品证书、检验报告

31. 种子标签：固定在种子包装物表面及内外的特定文字说明及图案。是种子生产者、销售者向种子使用者传递该种子质量状况及其它有关信息的方式，种子标签属种子质量证书的范畴。（外标签、标牌、内标签）

32. 免疫技术在种子检验中的应用：（1）种子纯度检验;（2）种子健康检验