转基因产品的转基因检测方法总述
转基因产品的检测方法根据检测靶标的不同可分为两类:一类是基于核酸(DNA)的检测方法,另一类是基于外源蛋白质靶标的蛋白质检测方法。目前使用最广的是第一类方法。
转基因成分检测方法还可分为定性检测与定量检测两类。定性检测方法可以检测样品是否含有转基因成分以及含有何种转基因成分;定量检测方法则可以检测样品中的转基因成分含量。
定性检测法根据检测靶标的不同还可以分为筛查法、基因特异性检测法、转化事件特异性检测法等。
检测样品中是否含有转基因成分的方法,又叫筛查法,是对转基因产品中的通用元件(包括启动子、终止子和标记基因)进行检测。最常见的通用元件有CaMV35S启动子、NOS终止子及报告基因NPT-Ⅱ。
检测样品中含有何种基因的方法,又称基因特异性检测法,可以知道转入植物的外源基因是什么。
检测样品中是否含有特定转基因品种成分,又称转化事件特异性检测法。根据外源基因插入位点的唯一性,通过检测外源基因的侧翼序列鉴定转化体属于何种品系的方法。
检测样品成分来自何种作物的方法,又称物种特异性检测法,可以通过检测物种特有的内标基因完成。如检测出大豆特有的内标基因lectin基因表明含有大豆成分,检测出玉米特有的zein基因则表明含有玉米成分。
实时荧光定量pcr技术,是指在PCR反应体系中加入荧光基团,利用荧光信号积累实时监测整PCR进程,最后通过标准曲线对未知模板进行定量分析的方法。这种方法可以精确地定量样品中的转基因成分含量。
荧光定量PCR所用的荧光探针主要有三种, TaqMan荧光探针、杂交探针和分子信标探针,其中 TaqMan荧光探针使用最为广泛。在该反应体系中,包括l对PCR引物和1条探针。探针只与模板特异性地结合,其结合位点在2条引物之间。所以,每经过一个PCR循环,荧光信号也和目的片段一样,有一个同步指数增长的过程。信号的强度代表了模板DNA的拷贝数。
基于蛋白质检测的主要方法是酶联免疫吸附法(enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA)。该法是依赖抗原(导入基因在受体作物中得到正确表达产生的蛋白质)和抗体能发生特异性结合的免疫学评估技术。
近几年来,科学家们以ELISA法为基础将特异性蛋白抗体涂抹在支撑物上,建立了测流试剂条(如lateral now)和试剂盒等快速检测方法。实际分析时只需将试剂条直接与样品中的蛋白质抗原接触即可,可以对转基因产品实行半定量分析。
转基因检测数据库提供国内外转基因检测方法检索工具:http://www.gmcrop.cn/crop_detection2.php