龙眼 DlWRKY57 基因克隆与拟南芥遗传转化

以龙眼成熟叶片为材料，利用实验室构建的龙眼转录组数据库，筛选出 DlWRKY57 基因 cDNA 序列，对其开放阅读框(ORF)进行克隆和生物信息学分析。结果表明，DlWRKY 57 基因 ORF 长度为 894 bp，编码297 个氨基酸，此蛋白属于 WRKY 基因家族中的Ⅱa 类，存在 1 个 WRKY 结合位点。通过生物信息学分析表明，该蛋白属于非跨膜亲水蛋白，预测定位于细胞核，存在 45 个氨基酸磷酸化位点。其二级结构由无规则卷曲、α- 螺旋和延伸链构成，其中无规则卷曲为二级结构中最主要的结构元件，并且二级结构与三级结构预测结果高度一致。同源基因进化树分析表明该基因与木薯亲缘关系最近。以 pMD18-T 和 pBI121 载体为基础，成功构建了植物超表达载体 pBI121-DlWRKY57，利用农杆菌花序法转化拟南芥，经 PCR 分子检测，获得含DlWRKY57 基因的拟南芥植株，该超表达载体的遗传转化为 DlWRKY57 基因功能的深入研究提供依据。