酸枣仁ISSR-PCR反应体系优化及引物筛选

本研究通过正交试验对酸枣仁ISSR-PCR反应体系中DNA模板用量、引物浓度、2×Taq Master Mix含量等参数进行优化，以建立酸枣仁的ISSR-PCR最佳反应体系。基于优化结果，从100条引物中共筛选出12条扩增结果良好、条带清晰的ISSR引物，并通过梯度PCR试验，对每一条引物的最佳退火温度进行确定。结果表明酸枣仁的ISSR-PCR最佳反应体系（20.0 μL）为DNA模板50.0 ng、引物0.6 μmol/L和2×Taq Master Mix 11.0 μL；扩增程序为95℃预变性3 min；94℃变性25 s，不同引物最佳退火温度下退火25 s，72℃延伸1 min，35个循环；72℃延伸5 min；4℃保存。该体系扩增获得的条带清晰、稳定且多样性良好，对于酸枣仁药材的亲缘关系和遗传多样性等分析研究具有一定的指导意义。