内生真菌(Alternaria oxytropis)酵母氨酸还原酶基因功能互补株的构建及 筛选鉴定

本研究构建内生真菌酵母氨酸还原酶基因(saccharopine reductase, sac)功能互补载体 pBARGPESac，制备 sac 缺失突变株 M1 的原生质体，将 pBARGPE-Sac 载体转化至 M1 原生质体后再生，构建和筛选出互补株 C1。用 RT-PCR 技术检测转化子，并进行 DNA 测序，验证互补株。提取 C1、M1 及野生株 OW7.8 的苦马豆素(Swainsonine, SW)，用 HPLC-MS 检测含量。结果显示：C1 中检测出 sac 和 hph 的表达，sac cDNA测序正确。C1 的 SW 水平高于 OW7.8 和 M1 (p<0.01)，说明 sac 促进了该内生真菌中 SW 的合成。通过对 sac功能的研究，为明晰真菌 SW 合成途径提供基础数据。