小豆VaWRKY33基因克隆及其响应锈菌侵染的表达分析

为明确小豆VaWRKY33基因在小豆抗锈病中的作用，本研究以小豆基因组DNA为模板克隆了该基因全长，VaWRKY33全长2 442 bp，包含4个内含子，编码区全长1 620 bp，编码539个氨基酸，蛋白质相对分子质量60.16 kD，理论等电点7.66，属于亲水性不稳定蛋白，有一个跨膜结构域，蛋白磷酸化位点85个。蛋白序列分析表明，VaWRKY33包含两个保守的WRKY结构域，锌指结构类型为C2H2型，属WRKY转录因子家族GroupⅠ亚家族。VaWRKY33启动子区分析发现，除核心作用元件外，主要包括光响应、逆境及组织特异性等三类顺式作用元件。基因表达分析表明，在‘庆红1号’(QH1，抗病)及 ‘宝清红’(BQH，感病)两个抗性不同品种中，VaWRKY33均受病菌侵染而诱导表达，抗病品种中于接种后12 h开始显著上调，并在整个侵染过程中始终维持较高水平，而感病品种中于接种后48-192 h显著上调，因而推测VaWRKY33在小豆抗锈病中发挥正调控作用。