橡胶树蛋白激酶HbNtf4的克隆、原核表达及纯化

植物有丝分裂原激活的蛋白激酶(mitogen-activated protein kinase, MAPK)参与调控植物低温胁迫应答，但橡胶树中 MAPK 同源蛋白 NTF4 至今未被克隆与鉴定，克隆和研究 HbNTF4 的功能对橡胶耐寒品种的选育具有重要意义。本研究成功从橡胶树 cDNA 中克隆出 HbNTF4 基因，氨基酸序列分析表明 HbNTF4与其他物种序列同源性很高。通过 qRT-PCR 发现橡胶树 4℃处理后 HbNTF4 基因表达量上升。将 HbNTF4构建至原核表达载体 pET-28a 上，在 Escherichia coli BL21 (DE3)中诱导并成功纯化出 HbNTF4 重组蛋白。SDS-PAGE 电泳检测表明 HbNTF4 在 37℃诱导 8 h，IPTG 浓度为 0.2 mmol/L 的条件下最优，最后成功纯化出符合预期大小的可溶性蛋白，为深入研究 HbNTF4 的生物学功能提供了理论依据。