木薯MeSSSIII基因的CRISPR/Cas9基因编辑载体的构建及验证

木薯块根淀粉葡聚糖链结构是决定淀粉品质的关键因素，可溶性淀粉合成酶Ⅲ (SSⅢ)是调控植物支链淀粉葡聚糖长链合成的关键酶，木薯有两个MeSSⅢ的同源基因MeSSⅢ-1 和MeSSⅢ-2。为了研究木薯MeSSⅢ对木薯块根淀粉品质形成的影响，根据MeSSⅢ-1 和MeSSⅢ-2 的保守区段，本研究构建了MeSSⅢ-1 和MeSSⅢ-2 的双基因编辑载体。利用在线软件 CRISPR-P v2.0同时设计靶标MeSSⅢ-1 和MeSSⅢ-2 的sgRNA，通过酶切连接构建重组 pCAMBIAP1301-Cas9-MeSSⅢ-gRNA质粒。将基因编辑载体转化农杆菌LBA4404后侵染木薯脆性胚性愈伤组织，筛选阳性脆性胚性愈伤组织，并提取其总 DNA。通过 PCR扩增靶点MeSSⅢ-1 和MeSSⅢ-2 的区段，并将扩增片段进行 Sanger测序，分析其编辑的靶标位点。结果发现MeSSⅢ-1 和MeSSⅢ-2 靶标位点被成功编辑，本研究有助于进一步获得MeSSⅢ基因突变体，以深入解析该基因在木薯淀粉合成通路中的作用。