利用CRISPR/Cas9技术获得水稻恢复系Bsr-d1基因突变体

为研究水稻抗稻瘟病基因 Bsr-d1 在杂交水稻恢复系中的功能，我们利用 CRISPR/Cas9 定点基因编辑方法，设计 2 个敲除靶标位点，构建了 Bsr-d1 基因编辑载体，并通过农杆菌介导的方法转化水稻恢复系品种‘GH998’，成功获得了转基因植株，并在 T1 代筛选到 4 个无转基因成分的纯合突变株系。纯合突变株系有4 种突变类型，包括第 199 号碱基处缺失 17 个碱基、第 212 号碱基处缺失 4 个碱基、第 216 号碱基处插入1个碱基、第 216 号碱基处插入 2 个碱基突变类型。通过蛋白序列分析，发现纯合突变株系都存在移码现象导致氨基酸变化并提前终止翻译。本研究成功利用 CRISPR/Cas9 基因编辑方法敲除水稻恢复系‘GH998’中Bsr-d1 基因，获得无转基因成分的纯合突变株系，为进一步研究Bsr-d1 基因在杂交水稻上的功能提供了理论依据和品种资源。