小麦(Triticum aestivum L.) UDP- 葡萄糖基转移酶 TaUGT6 基因的原核 表达及蛋白纯化

为了研究小麦抗赤霉病相关 UDP- 葡萄糖基转移酶 TaUGT6 基因的功能，利用 TaUGT6 基因的编码区构建了原核表达载体 pGEX-TaUGT6，转化大肠杆菌 BL21 (DE3)菌株后，经异丙基硫代半乳糖苷(isopropyl β-D-1-thiogalactopyranoside, IPTG)诱导表达对培养温度、培养时间进行了探索；然后利用十二烷基硫酸钠聚丙烯酰胺凝胶电泳(sodium dodecyl sulfate polyacrylamide gel electrophoresis, SDS-PAGE)检测重组蛋白，进行蛋白纯化。结果表明：TaUGT6 的编码区为 1 473 bp，导入大肠杆菌的 TaUGT6 基因能够被诱导表达，重组蛋白在 25℃经过夜诱导和 37℃经 6 h 诱导效果较好，表达重组蛋白的表现分子量与理论分子量基本一致，利用蛋白层析系统获得了纯度较高的重组可溶性蛋白。本研究为今后通过体外酶活分析、抗体制备等方法深入研究该基因的功能提供了依据。