海南油茶 SRAP-PCR 体系优化及有效引物筛选

海南岛为中国油茶资源分布的最南缘，海南油茶资源丰富，特色显著。本研究以海南油茶基因组 DNA 为模板，采用单因素试验和正交试验相结合的方法，分析 DNA 浓度、dNTPs 浓度、Taq DNA 聚合酶用量和引物浓度对海南油茶 SRAP-PCR 扩增结果的影响，构建海南油茶 SRAP-PCR 体系，对多态性引物组合进行筛选，为 SRAP 分子标记在海南油茶资源遗传多样性评价和鉴定提供条件。单因素试验结果表明：在本试验中，海南油茶基因组 DNA 浓度高低对扩增效率影响不大，低浓度 dNTPs 有利于获得较好的扩增产物，而中高浓度的 Taq 酶和引物可提高扩增效果。正交试验结果表明：在适宜浓度范围内，各因素对海南油茶 SRAP-PCR 扩增影响大小依次为：引物>dNTPs>Taq DNA 聚合酶>模板 DNA；总体系为 20 μL 时，最佳反应体系中模板 DNA 用量为 5 ng，dNTPs 浓度为 0.20 mmol/L，引物浓度为 0.60 μmol/L 以及 Taq DNA 聚合酶用量为 4.00 U。采用稳定 SRAP-PCR 体系，对 400 对 SRAP 引物进行筛选，获得 32 对多态性好、条带清晰的有效引物，可用于海南油茶遗传多样性分析和种质资源鉴定等研究。