甘蔗高粱花叶病毒 RT-LAMP 快速检测方法的建立及评价

为加强 SrMV 在蔗区的流行动态监控，本研究建立了反转录环介导等温扩增(reverse transcription loop-mediated isothermal amplification, RT-LAMP)方法。实验中针对 SrMV 外壳蛋白(coat protein, CP)保守序列设计特异性引物，构建了含 CP 基因的标准质粒用于 RT-LAMP 反应体系的优化，并采用实时浊度仪和优化的荧光可视化检测方法进行了特异性、敏感性及符合性实验。结果显示，RT-LAMP 方法特异性强，可检测到的标准质粒的最低量为 2.02 fg，其灵敏度是 RT-PCR 的 100 倍，对田间样品的检测结果与 RT-PCR 相符。建立的 RT-LAMP 方法特异性强、灵敏性高、操作简便，可用于甘蔗健康种苗中 SrMV 的检测及蔗区中 SrMV 流行动态监控。