正交设计优化青蒿 SRAP-PCR 反应体系及引物筛选

为了建立青蒿的 SRAP 最佳扩增体系，并筛选出 SRAP 多态性引物，本研究以青蒿叶片 DNA 为模板，采用正交试验设计，以 Mg2+、dNTP Mix、Taq DNA 聚合酶、引物和 DNA 模板 5 种因素 5 个水平，对青蒿 SRAP 反应体系进行研究。结果表明，青蒿 SRAP-PCR 最佳反应体系为：引物 0.6 μmol/L、Mg2+ 2.0 mmol/L、模板 DNA 5.1 ng、Taq DNA 聚合酶 2.0 U、dNTPs 0.25 mmol/L，总体积为 25 μL。各因素对扩增反应均有不同影响，其中引物浓度的影响最大，dNTPs 的影响最小。运用该体系对不同种质资源的青蒿进行验证，证明该体系稳定可靠，并在 30 个引物组合中筛选出了 25 对扩增条带清晰，多态性丰富的引物组合。这一结论为今后利用 SRAP 标记技术进行青蒿分子遗传学研究提供了科学依据。