棉花去泛素化酶基因 GhOTUD5 原核表达条件的优化

棉花组蛋白去泛素化酶 GhOTUD5 与生殖发育密切相关。为了获得大量可溶性表达的 GhOTUD5 蛋白，本试验对目的蛋白原核表达条件进行优化。采用分子克隆方法构建重组表达载体 pET-22b-GhOTUD5，转化大肠杆菌(Escherichia coli) BL21 (DE3)和 Transetta (DE3)，用异丙基 -β-D- 硫代半乳糖苷(isopropyl β-D-1-thiogalactopyranoside, IPTG)诱导目的蛋白表达。在对影响原核表达的四个单因素(菌体密度 OD600, 诱导剂 IPTG 终浓度, 诱导时间和诱导温度)分别分析的基础上，设计三水平的正交试验 L9(43)，摸索大量可溶性目的蛋白表达的最优条件。结果显示，目的蛋白 GhOTUD5 在 Transetta (DE3)中成功表达，在 BL21 (DE3)中不表达。在菌体密度 OD600 为 0.8、诱导温度为 28℃、IPTG 终浓度为 0.7 mmol/L、诱导 3 h 的条件下可溶性目的蛋白表达量最高，达到 13%左右。该研究结果为进一步研究 GhOTUD5 在棉花育性方面的功能提供了科学数据。