芒果 MiFTs 基因家族克隆及其酵母双杂诱饵载体的构建

成花诱导是开花植物生长发育过程中最为重要的一环，而开花整合因子 Flowering Locus T (FT)在这一过程中起非常重要的调控作用。目前，FT 基因调控芒果成花的作用机制尚不清楚。本研究以‘四季蜜芒’为材料，克隆验证了从转录组测序数据中挖掘获得的 3 个 FT 同源基因，命名为 MiFT1、MiFT2 和 MiFT3。生物信息学分析显示，3 个 MiFTs 基因编码区长度分别为 588 bp、540 bp 和 516 bp，分别编码氨基酸 196 个、180 个和 172 个，分子量分别为 48.97 kD、44.71 kD 和 42.27 kD，等电点分别为 4.99、5.06 和 5.06，3 个基因均含有一个保守的 PEBP 结构域。将 MiFT1、MiFT2 和 MiFT3 基因定向克隆到酵母表达载体 pGBKT7 上，通过菌落 PCR 和测序进行验证，并成功转化酵母菌株 Y2H Gold 感受态细胞。对诱饵质粒酵母菌进行自激活和毒性检测，发现 pGBKT7-MiFT1、pGBKT7-MiFT2 和 pGBKT7-MiFT3 在酵母菌种均不具备自激活性和毒性。此酵母诱饵蛋白表达载体被成功构建，为后续蛋白互作筛选提供参考。