杜仲 EuGT2 基因的原核表达及蛋白纯化

本研究以克隆所得杜仲(Eucommia ulmoides) EuGT2 基因为基础，利用基因重组技术构建原核表达载体 pMCSG19-EuGT2。重组载体转化到 E. coli Rosetta (DE3)中，用 0.05 mmol/L 异丙基 β-D- 硫代半乳糖苷(IPTG)在 37℃下诱导 6 h。使用镍 - 亚氨基二乙酸(Ni-IDA)亲和层析柱进行纯化，并用 15%十二烷基硫酸钠 - 聚丙烯酰胺(SDS-PAGE)凝胶电泳进行检测。研究结果表明，杜仲 EuGT2 基因在 E. coli Rosetta (DE3)中得到成功表达，重组蛋白表达形式为部分包涵体、部分可溶性蛋白。经 SDS-PAGE 凝胶电泳检测，在相对分子质量约 56 kD 处有 1 条特异性蛋白条带，经质谱鉴定该特异性蛋白条带确为杜仲 EuGT2 蛋白。以上研究结果为后续研究杜仲糖基转移酶的功能提供了科学依据。