拟南芥 AtCYS6 基因酵母双杂交诱饵载体的构建及鉴定

为了筛选与拟南芥半胱氨酸蛋白酶抑制剂基因 AtCYS6 相互作用的蛋白，构建其酵母双杂交诱饵表达载体。本研究利用 PCR 方法扩增得到拟南芥 AtCYS6 的基因片段，与诱饵载体 pGBKT7 连接构建诱饵表达载体，经双酶切以及测序检测验证重组载体构建成功后，通过醋酸锂法将诱饵表达载体 pGBKT7-AtCYS6 与空载体 pGBKT7 分别转化到 Y2HGold 酵母菌株，检测其是否有自激活能力以及对宿主酵母菌株是否有毒性作用。结果表明：经 PCR 扩增后得到了 AtCYS6 基因，成功构建了无自激活和没有毒性的诱饵表达载体 pGBKT7-AtCYS6。本研究结果可进一步为筛选与 AtCYS6 相互作用的蛋白质及功能研究提供科学依据。