甘薯病毒多重 RT-PCR检测方法的建立

为了快速进行甘薯病毒田间检测和脱毒苗诊断，该研究建立了一个能够同时检测 SPCSV、SPLV 和 SPFMV 这 3 种病毒的多重 RT-PCR 检测方法。根据 GenBank 公示的甘薯病毒基因序列来设计 3 种甘薯病毒的引物，分别对模板浓度、退火温度、Mg2+浓度和循环次数进行优化，同时对模板浓度进行 10 倍梯度稀释，检测多重 RT-PCR 灵敏度。结果显示，模板浓度为 19 ng/μL、退火温度为 52℃、Mg2+浓度为 0 mmol/L、循环次数为 40次时，可以同时扩增出大小为 276 bp、570 bp、425 bp三种病毒的基因片段，多重 RT-PCR 检测灵敏度为 10-4，单一 RT-PCR 检测灵敏度为 10-3，多重 RT-PCR 检测灵敏度是单一 RT-PCR 的 10 倍。该研究使用优化的多重 RT-PCR 检测技术可获得稳定、灵敏、准确、高效地和同时地检测田间复合侵染的 3 种甘薯病毒。