马铃薯StSOD1基因酵母双杂交诱饵载体的构建及鉴定

为了筛选与马铃薯超氧化物歧化酶(superoxide dismutase, SOD)基因 StSOD1 作用的上游蛋白，构建其酵母双杂交诱饵重组载体。本研究利用 PCR 方法扩增得到马铃薯 StSOD1 的基因片段，通过与 pMD-T18连接构建克隆载体，经验证构建成功后，与诱饵载体 pGBKT7 连接构建诱饵重组载体，经双酶切以及测序检测验证重组载体构建成功后，通过 PEG/LiAc 法将诱饵载体 pGBKT7-StSOD1 与空载体 pGBKT7 分别转化到酵母 AH109 感受态细胞中，检测其是否有自激活作用和对酵母菌株的毒性作用。结果表明：经 PCR 扩增后得到了 StSOD1 基因，成功构建了诱饵重组载体 pGBKT7-StSOD1，并且此诱饵载体无自激活活性和对酵母菌株的毒性作用。此研究结果可进一步为筛选与 StSOD1 互作的蛋白质及功能研究提供科学依据。