菊花‘金不凋’高效再生体系构建及抗生素筛选压力研究

‘金不凋’属于典型的日中性菊花，可作为日中性菊花开花分子机理的理想研究材料，目前尚未建立‘金不凋’的再生及遗传转化体系。本研究以‘金不凋’叶片为外植体，分别对影响再生及转化体系的主要因素进行试验。结果表明‘：金不凋’叶盘愈伤组织的不定芽分化最佳培养基为 MS+6-BA 1.5 mg/L+NAA 0.5 mg/L，不定芽分化率为 90.0%，平均再生不定芽数达 5.555 6 个；相关性分析表明褐化率与愈伤诱导率以及平均再生愈伤组织数之间存在显著的负相关关系；试管苗最佳生根培养基为 MS，生根率为 100%。在‘金不凋’再生体系建立的基础上，初步建立了其遗传转化体系：‘金不凋’叶盘经过 24 h 预培养，在菌液浓度 OD600=0.6 的农杆菌中侵染 10 min，共培养 2 d，延迟培养 5 d，叶片不定芽分化潮霉素临界浓度为 2 mg/L，生根筛选潮霉素临界浓度为 5 mg/L 时，转化效率最高。通过潮霉素抗性筛选和 PCR 鉴定，获得 3 株 PCR 阳性菊花苗，转基因阳性苗频率为 2.5%，本研究为‘金不凋’的基因工程育种提供了技术基础。