毛梾 SSR-PCR 反应体系优化及引物筛选

为了确定毛梾 SSR-PCR 最佳的反应体系，本研究采用 L16(45)正交设计试验方法对毛梾 SSR-PCR反应体系的各影响因素进行了优化筛选，利用改良 CTAB 法提取毛梾叶片基因组 DNA 为模板，对模板DNA、dNTPs、Mg2+、引物、Taq DNA 聚合酶 5 个因素的用量进行了 4 个水平的优化筛选试验。结果显示，适用于毛梾的 SSR-PCR 最佳反应体系为：总体系 20 滋L，dNTPs 浓度 0.25 mmol/L，Mg2+ 浓度 1.25 mmol/L，模板DNA 用量为 75 ng，Taq DNA 聚合酶 1 U/20 滋L，引物浓度为 0.5 mmol/L。利用优化后的反应体系对毛梾 SSR引物进行筛选，可从 34 对引物中筛选出 9 对具有多态性的 SSR 引物，进一步验证了毛梾 SSR-PCR 反应体系具有较好的稳定性和可重复性。本研究为毛梾的种质资源分析、分子标记辅助育种、遗传多样性分析等方面的进一步研究提供了技术支持。