稻瘟病新抗性基因 Pi39 候选基因 Pi39E 长片段载体的构建

稻瘟病新抗性基因 Pi39 来源于粳稻品种 Q15，定位于水稻第 12 号染色体，前期研究发现候选基因区域预测有 12 个抗病相关候选基因，其中候选基因 Pi39E 最大，克隆的难度较大。为了构建 Pi39E 长片段载体，本实验通过加大反应底物的浓度，目的片段的质量浓度为 124 ng/μL，质粒载体的质量浓度为 158 ng/μL，目的片断与质粒 DNA 按 1.15∶1 的摩尔浓度比进行连接反应，在 9 μL 的总体系中加入 1 μL 的 PEG4000，同时采用电击大肠杆菌 DH5α 转化方法优化实验方案，成功构建该载体。本结果对新抗性基因 Pi39 精细定位及其功能的研究具有重要意义。