蒙古高原特有植物蒙古莸ISSR-PCR反应体系优化及引物筛选

建立并优化适用于蒙古莸的ISSR-PCR扩增反应体系并筛选出稳定的ISSR引物，进一步研究蒙古莸群体的遗传多样性水平。采用单因素试验设计方法，以蒙古莸基因组DNA为ISSR-PCR扩增模板，对dNTPs、引物、Mg2+、Taq DNA聚合酶、模板DNA进行优化。在此基础上，筛选出扩增条带清晰且多态性好的有效引物，并确定各引物最佳退火温度，最后用呼和浩特大青山、乌海渡口村、赛罕塔拉柄扁桃保护区的24个蒙古莸野生品种为材料验证体系的稳定性。最佳反应体系为：在总体积20μL的反应体系中，含10×PCR buffer2.5ul，Mg2+2mmol/L，Taq DNA聚合酶1.5U，dNTP1.5mmol/L，引物0.5μmol/L，模板DNA15ng。此外，从100条ISSR引物中筛选出12条清晰稳定的引物，并确定了引物各自的最佳退火温度。首次建立了蒙古莸ISSR-PCR最适反应体系，这一体系的建立可应用于后续蒙古莸遗传多样性的研究。