靶向马铃薯 StProDH1 基因的 CRISPR/Cas9 sgRNA 表达载体构建

CRISPR/Cas9 基因编辑系统已成为许多作物基因功能研究和品种改良的重要工具。脯氨酸(Pro)在植物响应干旱胁迫方面起着重要作用，脯氨酸脱氢酶 ProDH 是脯氨酸分解途径中的限速酶。为了研究StProDH1 在马铃薯脯氨酸代谢中的作用，本研究以 StProDH1 为靶基因，构建了表达马铃薯脯氨酸脱氢酶gRNA 的 CRISPR/Cas9 基因敲除系统，在 StProDH1 基因 5' 端第一个外显子上为靶标区域选择设计 sgRNA，以 pP1C.4 为模板，克隆得到 sgRNA 克隆框，将得到的 sgRNA 克隆框通过同源重组技术连接到 pP1C.4 载体中，获得 pP1C.4-Cas9-ProDH1-gRNA 载体。通过设计引物特异性扩增以及测序进一步确定 sgRNA 准确地连入载体，这对马铃薯中脯氨酸累积及其培育抗旱马铃薯新品种具有重要意义。