诺丽转基因植株的Southern杂交鉴定

诺丽是含籽量非常多的植物，种子占据了果实的大部分空间。为了实现无籽化诺丽，本课题组通过将引进的无籽基因转化至诺丽中，获得了大量的诺丽抗性芽，经检测鉴定获得了一些阳性转化子。在检测鉴定中由于非特异性扩增、农杆菌污染等问题难免出现一些假阳性转化子，因此， 为了检测无籽基因是否真正整合到诺丽染色体上，采用地高辛随机引物标记法标记探针对诺丽转化子进行 Southern 杂交检测，以检测无籽基因在诺丽植株上的整合情况。检测过程包括基因组DNA的提取酶切、质粒酶切、探针的制备、转膜、杂交等。本实验选用 8个转无籽基因的诺丽苗，编号为 G1、 G3、 G4、 G5、 G7、 G8、 G9、 G10， 1个阴性对照，编号为 T；另外，取无籽基因质粒作为阳性对照组。结果显示，在检测的 8个样品中，只有诺丽转基因株系 G9有杂交条带，说明无籽基因成功转入到 G9染色体上。在通过转基因生物安全评价申请后，筛选出来具有目的基因并且正常表达的 G9株系能够继续进行下一步的田间释放，进而做下一步的实验研究。