林烟草 NsylCBL10 互作蛋白激酶 NsylCIPK 的鉴定与分析

植物中的类钙调神经素 B 亚基蛋白 CBL (calcineurin B-like protein)家族成员与其互作蛋白激酶CIPK (CBL-interacting kinase protein)家族成员形成了复杂精细的 CBL-CIPK 信号调控网络，在解码生物和非生物胁迫激发的钙信号及信号的进一步传导中发挥重要作用。CBL 家族成员 CBL10 参与植物抵抗高盐胁迫、应对病菌侵染、参与分生组织和花器官发育、调节离子平衡等多个过程，对其下游互作 CIPK 家族成员的筛选与鉴定对于明确上述调节机制至关重要。为了鉴定林烟草(Nicotiana sylvestris) NsylCBL10 下游互作NsylCIPK 家族成员，本研究首先以拟南芥(Arabidopsis thaliana) AtCIPK 家族成员和水稻(Oryza sativa) OsCIPK家族成员基因的 CDS 序列为检索序列，利用 NCBI 和中国烟草基因组数据库对林烟草中可能存在的NsylCIPK 家族成员进行了预测；然后通过 RT-PCR 方法对预测到的 NsylCIPK 家族成员进行了克隆并利用生物学分析软件对其基因结构和蛋白保守结构域进行了分析；最后通过酵母双杂交实验鉴定了与NsylCBL10 互作的 NsylCIPK 家族成员。结果表明，在林烟草中可能存在 28 个 NsylCIPK 家族成员，实际克隆获得了 20 个 NsylCIPK 家族成员，在酵母双杂交体系中与 NsylCBL10 互作的只有 1 个 NsylCIPK 家族成员NsylCIPK14a。本研究为解析林烟草及其他物种中 CBL-CIPK 信号通路的调节功能提供了试验数据。