水稻UDP-N-乙酰葡萄糖胺酰基转移酶基因（OsLpxA）RNA干扰载体的构建及遗传转化研究

细菌脂多糖由 O- 抗原，核心多糖和脂质 A 三部分组成，脂质 A 是细菌内毒素活性的根源。植物脂多糖与细菌脂多糖组成基本相似，但不具有微生物脂多糖的高毒性。目前，对植物脂多糖的合成机制缺乏最基本的认识，因此研究植物脂多糖的合成具有重要的科学价值。作者在水稻基因组中发现一个含有大肠杆菌EcLpxA 功能结构域的基因，命名为 OsLpxA，该基因催化水稻脂质 A 合成的第一步反应。本研究用水稻(Oryza sativa subsp. Japonica)苗期的叶片为材料，提取总 RNA 并以此为模板，用反转录 PCR 扩增 OsLpxA 基因的 siRNA 靶序列，并将其连接到表达载体 pTCK303 上，构建了 RNA 干扰载体pTCK303-OsLpxA-RNAi。将该载体通过农杆菌介导法转化水稻，共获得 59 株具有潮霉素抗性的转化苗。然后利用潮霉素的特异性引物对全部抗性苗进行 PCR 检测，其中有 38 株转化苗呈阳性，表明潮霉素标记基因已整合到了水稻的基因组中。最后，利用定量 PCR 检测 38 株阳性苗中 OsLpxA 基因在转录水平表达的变化。结果表明，其中 27 株阳性苗中导入的 OsLpxA 基因 RNA 干扰结构成功地降低了目的基因的表达。该结果为后续对 OsLpxA 基因功能的研究提供参考。