橡胶树胶孢炭疽菌 T-DNA 插入突变体库的构建及插入位点分析

橡胶树炭疽病主要由胶孢炭疽菌(Colletotrichum gloeosporioides)引起，是影响橡胶产量的重要病害之一。病原菌功能缺失突变体的构建是研究病菌致病分子机理的有效手段。为了获得充足的胶孢炭疽菌突变体用于解析其致病机理，本研究对根癌农杆菌介导的胶孢炭疽菌遗传转化体系进行优化。结果表明，当AGL-1 农杆菌 OD600=0.8、胶孢炭疽菌孢子浓度为 106 个/mL、乙酰丁香酮(AS)浓度为 100 滋mol/L 时，共转化48 h，可使转化效率达到 480 个转化子/106 个孢子。基于这个体系，构建了一个库容量为 861 的 T-DNA 突变体库。随机挑选 8 个转化子进行 PCR 验证，结果均为阳性。从突变体库中筛选出 1 株致病力下降的突变体，对其进行 TAIL-PCR 扩增插入位点侧翼序列，得到一个 750 bp 序列进行序列测定。通过与野生型菌株基因组进行序列比对，确定了 T-DNA 的插入位置。为进一步研究橡胶树胶孢炭疽菌致病分子机理提供理论参考。