农杆菌介导的 GbWOX9 基因对海岛棉胚性细胞的遗传转化

为探究 WOX9 基因在棉花体细胞胚胎发育过程中的功能，借助农杆菌介导化学试剂诱导型植物表达载体 pTA7002/GbWOX9 和 pTA7002/GbWOX9 anti 对海岛棉‘新海 16’胚性细胞进行遗传转化，以此利用化学诱导剂在胚性细胞中诱导 GbWOX9 的过量或抑制表达。研究结果表明在菌液 OD600抑0.5~0.6 时进行 15min 的农杆菌侵染并共培养 24 h 之后，将侵染的细胞在 500 mg/L 头孢和 20 mg/L 潮霉素的抗性培养基上筛选继代两次，最终获得若干抗性阳性胚性细胞。进一步将抗性阳性细胞在化学诱导剂 30 滋mol/L 地塞米松处理 5 h 后，通过 qRT-PCR 技术对其进行 GbWOX9 的基因表达鉴定，结果表明与对照组相比，正、反义转基因抗性阳性细胞中的 GbWOX9 基因表达量皆有显著差异。该研究初步建立了以潮霉素为筛选标记的海岛棉遗传转化体系，并在此基础上将 GbWOX9 正义和反义链成功导入‘新海 16’胚性细胞中，为其功能的鉴定提供了参考。