利用 CRISPR/Cas9 系统创制紧密连锁的 M320 与 M330 基因双突变体

为了研究含有多 MATH 结构域基因的功能，本研究利用 CRISPR/Cas9 基因编辑系统对拟南芥中两个紧密连锁的功能冗余基因 M320 (AT2G25320)和 M330 (AT2G25330)进行共敲除，获得了之前通过杂交无法获得的多 MATH 结构域基因双突变体材料。通过构建针对 M320 和 M330 基因的CRISPR/Cas9 共敲除质粒，借助农杆菌介导的浸花法成功转化野生型拟南芥 Col-0。最终测序验证显示多 MATH 结构域基因被成功敲除。M320、M330 以及这两个基因同时被敲除的成功率分别是 5.13%、17.95%和 2.56%；通过测序分析发现突变体共产生了 3 种可造成移码突变的杂合突变类型：分别为在靶位点插入一个 A 或 T 以及缺失一个 G。本研究为我们解析多 MATH 结构域基因的功能提供了材料基础，同时为紧密连锁基因的功能研究提供了创
制突变体的有效方法。