橡胶树转录因子HbCBF2和HbCBF3的克隆和原核表达分析

橡胶树起源热带雨林，对低温敏感。在中国，橡胶树(Hevea brasiliensis)种植受到严重的低温胁迫影响，而 CBF/DREB1 (C-repeat binding factor/dehydration responsive element binding factor 1)是低温信号通路中重要的转录因子，但目前橡胶树中仅克隆到 HbCBF1。本研究从橡胶树中克隆出两个新的 CBF 家族基因HbCBF2 和 HbCBF3。经测序，HbCBF2 和 HbCBF3 分别编码了 234 个和 242 个氨基酸。氨基酸序列分析表明HbCBF2 和 HbCBF3 均含有 CBF 家族特有两个短肽序列包括一个保守的 DNA 结合结构域和 NLS 簇。通过构建进化树发现 HbCBF2、HbCBF3 与 HbCBF1 以及拟南芥中的 CBF 序列同源性很高。将 HbCBF2 和HbCBF3 构建到 pGEX4T-1 原核表达载体上，在 Transetta (DE3)中进行表达。SDS-PAGE 电泳检测它们蛋白质表达量为 51.8 kD 和 53 kD，与预期一致。对蛋白的诱导条件进行优化，构建融合表达质粒 pGEX4T-1-CBF2 和 pGEX4T-1-C BF3，在 28℃、IPTG 浓度为 0.4 mmol/L 的情况下表达量最佳。实验为纯化蛋白和研究HbCBF2 和 HbCBF3 在橡胶树中的功能提供理论帮助。