利用 CRISPR/Cas9 技术创建 OsIPCS 家族基因突变体

肌醇磷酸神经酰胺合酶(inositol phosphoryl ceramide synthase, IPCS)是植物鞘脂合成途径中的一种关键酶，在植物生长发育和逆境适应中具有重要作用。本研究在 OsIPCS 基因外显子区域设计带有 PAM序列的靶位点，利用 PCR 扩增获得 OsIPCS 基因 sgRNA 表达盒，并成功构建 CRISPR/Cas9 敲除载体；采用根癌农杆菌介导的遗传转化获得 3 个 OsIPCS 基因的 T0 代 CRISPR 转基因植株；通过 PCR 扩增和测序确定突变类型，其中 2 株不同突变类型的 OsIPCS1 突变单株，27 株不同突变类型的OsIPCS2 突变单株，9 株不同突变类型的OsIPCS3 突变单株，为进一步开展 OsIPCS 基因功能的研究提供科学依据。