拟南芥多聚腺苷酸化因子CFIm25植物表达载体的构建及亚细胞定位分析

CFIm25是前体mRNA多聚腺苷酸化的关键因子，在动物中研究较多，主要存在于细胞核和细胞质。而在植物中，目前的报道仅见于细胞核。为探究该因子在拟南芥中的功能及亚细胞定位，本研究首先对CFIm25做进化分析，结果显示，CFIm25的两个亚基亲缘性极高，说明二者功能相似，另外，它们与AT5G51660的亲缘关系也很近，暗示三者可能参与相同的生物学事件。接着我们克隆了拟南芥(Arabidopsis thaliana) CFIm25的两个基因At4g25550和At4g29820，构建植物表达载体pCAMBIA3301-ACT2-CFIm25并进行烟草(Nicotiana tabacum)转化。荧光显微镜观察发现，CFIm25在烟草下表皮细胞的细胞质和细胞核均有分布，进一步分析发现CFIm25主要定位在细胞质。说明CFIm25不仅存在于植物细胞核，也存在于在细胞质中，提示该因子可能在细胞质中发挥一定的生物学功能。最后，采用农杆菌介导的花蕾浸泡法将重组质粒转化拟南芥，经Western blot检测证实At4g25550/At4g29820已成功整合到部分植株的基因组中。综上，本研究为进一步深入探索CFIm25在拟南芥细胞质中的功能提供了理论依据。