马铃薯无标记双抗病毒转基因技术初步研究

针对马铃薯生产中存在的病毒型退化和转基因本身存在的生物安全性问题，把新近发展迅速的RNA干扰技术和无标记转基因技术引入植物抗病毒基因工程，培育生物安全型抗多病毒转基因马铃薯，探索一条多抗甚至多免疫的生物安全型转基因新途径。通过农杆菌介导，将抗马铃薯X病毒和Y病毒的RNA干扰型基因结构转入马铃薯大西洋、克新1号等新疆主裁栽培品种，通过PCR检测获得对X病毒和Y病毒具有双重高抗或免疫的无标记基因的高生物安全型转基因马铃薯植株。最终，通过多次筛选试验，确定了农杆菌OD600为0.3-0.5为宜，但以0.5最佳，预培养2 d，侵染时间为10 min，共培养2~3 d的最佳转化条件。通过特异性引物PCR扩增，部分再生植株得到与阳性对照一样的目的条带，目的基因已初步整合到马铃薯基因组中。本研究获得的抗病毒无标记转基因马铃薯，其目的基因为RNA干扰型结构，转基因植株的抗性是RNA沉默的结果。由于所转基因的mRNA已经降解成小片段，转基因植株不存在标记基因，规避了目的基因和标记基因潜在的生物安全性问题。