山羽藓ISSR-PCR反应体系优化及引物筛选

本研究采用L16(45)正交试验设计法对山羽藓ISSR-PCR反应进行优化试验。研究结果表明，山羽藓ISSR-PCR最佳反应体系(25 μL)为：Taq DNA聚合酶0.8 U，Mg2+ 1.5 mmol/L，dNTPs 0.4 mmol/L，引物0.6 μmol/L和模板DNA 40 ng，对该反应体系的影响顺序为：Taq DNA聚合酶>引物>dNTPs>模板DNA>Mg2+。同时筛选出12条适合山羽藓的ISSR引物，并确定了每条引物的最适退火温度。所建立的体系稳定可靠，条带清晰且多态性丰富，可为后续开展山羽藓种植资源、遗传多样性及分子亲缘地理学研究奠定基础。