枸杞Lb14-3-3b基因的克隆及其在不同组织中的表达

在前期枸杞花药发育蛋白质组差异研究的基础上，利用RT-PCR技术，从宁夏枸杞“宁杞1号”花药中克隆出了一个花药发育相关蛋白基因。根据生物学信息分析，该基因属于14-3-3蛋白基因家族，命名为Lb14-3-3b，并对基因序列及其编码的氨基酸序列进行基本性质分析，预测其编码蛋白的二、三级结构。利用基因枪法将融合有绿色荧光蛋白(GFP)的表达载体转入洋葱表皮细胞，分析Lb14-3-3b基因的亚细胞定位。采用qRT-PCR技术分析了Lb14-3-3b基因在枸杞不同组织中的表达，并构建了Lb14-3-3b基因的正、反义表达载体pCambia1305.1-35s-Lb14-3-3b(+)及pCambia1305.1-35s-Lb14-3-3b (-)。结果表明：Lb14-3-3b基因的ORF长747 bp，具有14-3-3家族保守结构域。枸杞Lb14-3-3b与马铃薯、番茄的14-3-3蛋白处于进化树同一分枝上，亲缘关系最近。该蛋白是一个主要由α-螺旋构成的异源二聚体，它的两个亚基形成了一个靶蛋白结合活性中心。Lb14-3-3b亚细胞定位于细胞质中，该基因在枸杞生殖器官中优势表达。成功将Lb14-3-3b基因的ORF插入植物表达载体的CaMV35s启动子后面，并将Lb14-3-3b基因的正、反义表达载体转入农杆菌GV3101中。为进一步探究该基因在枸杞花药发育中的调控机制提供了载体和研究基础。