用于植物多基因表达载体构建的质粒系统

为克服目前常用于植物基因表达载体构建的质粒由于酶切位点有限，目的基因片段难于插入，缺少植物基因表达所必须的启动子、终止子和筛选标记等功能元件，无法构建多个基因表达载体等缺点，本研究通过对大肠杆菌(Escherichia coli)质粒pUC18和双核农杆菌(Agrobacterium tumefaciens) Ti (tumer inducing)质粒pBI121进行改造，建立了一套适用于植物基因表达载体构建的质粒系统，即重组质粒pKAFCR80和pKAFCR100。pKAFCR80具有植物基因表达最常用的CAMV 35S启动子(cauliflower mosaic virus 35S promoter)和NOS终止子(nopaline synthase terminator)，并在其上游、中间和下游引入了多个克隆酶切位点，利用PCR等方法克隆得到的目的基因片段可以多种方式连接到35S启动子与NOS终止子之间；pKAFCR100具有卡那霉素NPT II (neomycin phosphotransferase II)耐性基因和sGFP (synthetic green-fluorescent protein with S65T mutation)绿色荧光蛋白报告基因，以及其中间的多克隆酶切位点。pKAFCR80与pKAFCR100两个质粒的配合使用，可以方便地构建植物单个或多个基因表达载体。本研究以PCR扩增的甜叶菊葡萄糖基转移酶三个基因为材料，利用该质粒系统以单独和组合形式成功地构建了植物表达载体，验证了该系统的实用性。