枸杞ISSR-PCR反应体系优化与遗传多样性研究

为建立枸杞ISSR-PCR反应体系，通过单因子优化试验和L16 (45)正交试验设计对相关参数进行了优化，其最优体系为20 μL含Mg2+ 2.0 mmol/L、dNTPs 0.25 mmol/L、引物0.6 μmol/L、TaqDNA聚合酶0.75 U、模板DNA60 ng。对优化体系进行了稳定性检测，并从100条ISSR引物中筛选出12条，对7份枸杞资源进行了PCR扩增。实验结果表明，12条ISSR引物对7 份枸杞种质资源共扩增出132个条带，其中多态性条带共123条，比率为93.2%；7份枸杞资源遗传距离分布在2.57-8.39，其中长辣椒与黑枸杞遗传关系最远；平均有效等位基因数为1.7156，平均Nei's多样性指数为0.4039，平均Shannon’s指数为0.5888。ISSR标记可用于枸杞遗传多样性研究。