烟草BtCry1Ac基因叶绿体转化载体的构建与验证

叶绿体是外源基因表达的理想场所。为了探究植物叶绿体转化技术，本研究成功构建了BtCry1Ac基因的烟草叶绿体转化载体，其中以aadA基因作为筛选标记，叶绿体基因组同源片段选用rbcL基因与accD基因。采用基因枪轰击法进行叶绿体转化，以壮观霉素300 mg/L作为初筛浓度，并逐步提高筛选压力，经过3轮筛选后，通过PCR检测，有6个株系检测到了外源Bt基因；同时进行的毒蛋白测定中，有5个株系可检测到Bt毒蛋白，但表达量普遍偏低，T-4的毒蛋白含量最高，为19.32 ng/mL，说明烟草叶绿体基因组中还有大量拷贝没有完全同质化。通过对烟草叶绿体载体构建及转化技术的摸索，将为未来开展其它植物的叶绿体转化研究提供参考。