三角梅4,5-多巴双加氧酶基因的克隆与表达分析

本研究通过同源克隆技术对三角梅(Bougainvillea glabra Choisy)甜菜色素合成途径中4,5-多巴双加氧酶(4,5-DOPA dioxygenase, DOD)基因进行了克隆分析。随后将获得的三角梅DOD基因克隆到表达载体pET30b (+)上，构建原核表达载体pET30b (+)-DOD，并转入大肠杆菌Rosetta (DE3)进行诱导表达。同时结合实时荧光定量PCR技术分析了遮光处理对三角梅DOD表达量和甜菜红素含量的影响。结果表明，三角梅DOD基因的cDNA序列长度为804 bp，编码268个氨基酸，GenBank登录号为KY676801。系统进化树分析显示该DOD与叶子花(Bougainvillea spectabilis Willd.)和紫茉莉(Mirabilis jalapa L.) DOD亲缘关系比较近；原核表达得到约37 kD的目的蛋白，这与预测结果相符合；实时荧光定量PCR结果表明，遮光处理使DOD表达量；同时，甜菜红素含量也表现为下降。这些研究结果为解析三角梅甜菜色素合成途径提供了理论依据，为三角梅花色形成机制的研究提供了基础资料。