甘蓝型油菜CONSTANS基因植物过表达载体构建及转基因植株的获得

甘蓝型油菜CONSTANS目的基因的克隆以NCBI上公布的序列设计全长扩增引物进行扩增。对目的基因片段测序并进行酶切位点分析，设计酶切引物(BamHⅠ, SacⅠ)，通过BamHⅠ和SacⅠ双酶切将目的基因片段连接在真核表达载体pBI121上，PCR鉴定结果表明PBI121+CONSTANS过表达载体已成功构建。将过表达载体转化感受态EHA105细胞，通过拟南芥花絮侵染T0代种子，用含卡拉霉素(50 mg/L)的MS固体培养基进行筛选，获得阳性植株。通过PCR鉴定，结果表明PBI121+CONSTANS过表达载体已成功导入拟南芥中，获得转基因阳性苗12株，为下一步基因功能分析做好了准备。