中国科学家新建立一种高灵敏的电化学发光免疫检测方法

中国国民核生化灾害防护国家重点实验室防化研究院的研究人员利用elisa技术以剧毒生物毒素相思子毒素(Abrin)为检测对象，建立了一种高灵敏的电化学发光免疫检测方法。该论文已发表于近期的《分析化学》杂志上。

相思子毒素电化学发光检测原理：a. 多抗; b. 相思子毒素; c. 生物素化单抗; d. 三联吡啶钌; e. 链霉亲和素包被的磁性微球

传统的磁免疫电化学发光(ECL)检测方法是将磁微球用作捕获抗体的载体，利用其较大的反应面积及顺磁性来实现对检测物的快速结合与分离。由于单个抗体分子用作标记探针时表面可修饰的基团有限，在靶标浓度很低时，标记探针数量很少，很难检测到，这影响到灵敏度的进一步提高。

本研究将酶联免疫吸附分析(enzyme linked immunosorbent assay，ELISA)在酶标板上进行的抗体包被、封闭、抗原结合、二抗结合等程序化的操作步骤与磁微球作为标记探针载体的优势相结合，以剧毒生物毒素相思子毒素(Abrin)为检测对象，建立了一种高灵敏的电化学发光免疫检测方法。实验过程如图所示，首先在酶标板上吸附固定相思子毒素多抗，与相思子毒素作用后再与生物素化的单抗结合，形成双抗体夹心免疫复合物，然后通过生物素-链霉亲和素特异相互作用连接三联吡啶钌标记的亲和素包被磁性微球形成磁性微球免疫复合物。将复合物从酶标板上解离后进行电化学发光检测。

这样，结合于酶标板的磁微球的量即可反映Abrin 的浓度，且磁微球表面携带大量标记物，可放大检测信号，提高检测的灵敏度。利用此方法检测相思子毒素，浓度在2-200 ng/ L 范围内与电化学发光强度呈良好的对数线性关系，检测限达2 ng/ L。该方法灵敏度较传统方法提高两个数量级，也远高于目前国内外已报道的方法。该法特异性高、重现性好，可用于痕量蛋白的高灵敏检测，在临床诊断、环境监测、生物防护等领域有较好的应用前景。

论文链接：A New Electrochemiluminescence Immunoassay Based on Magnetic Microbeads as Carrier of Labels