帝斯曼专利:酵母中过表达ICE2可以增强细胞色素P450还原酶的稳定性
发表日期:2017-03-29 11:22PM 阅览次数:
专利首先在酿酒酵母中,同时表达来源于Hyoscyamus muticus的二烯加氧酶(HPO)和来源于Arabidopsis thaliana的细胞色素P450还原酶(CPR),构建了出发菌株。表达HPO/CPR的工程菌细胞可以催化(+)-朱栾倍半萜转化为反式-益智醇,催化反应结果显示,当工程菌中继续过表达Ice2基因时,对(+)-朱栾倍半萜转化效率较对照提高了40%。
随后,专利通过在上述出发工程菌中表达来源于C .nootkatensis的朱栾倍半萜合酶(ValS)构建了可內源合成 (+) -朱栾倍半萜的工程菌。此种情况下,过表达ICE2具有等同的效果,反式-益智醇产量较对照增加了约50%
专利进一步通过qRT-PCR、western blot方法,验证了过表达ICE2可以增强CPR的活性稳定性。电子显微镜图片观察到,ICE2的过表达显著增加了内质网膜的量,推测应该是增加内质网膜量可以维持CPR的跨膜结构稳定性。此外专利也验证了,ICE2过表达对CPR活性稳定性增强作用具有一定的普遍性,在毕赤酵母中也发现了相同的效果
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