红芪ISSR-PCR体系的建立及优化

通过单因素与中心复合设计相结合的方法建立优化红芪ISSR-PCR反应体系，并筛选引物，优化电泳时间及扩增循环数。建立的红芪ISSR-PCR反应体系为：25 µL反应体系中10×PCR Buffer (Mg 2+)3.5 µL、模板DNA (30 ng/µL) 2 µL、PCR扩增引物2 µL、TaqDNA聚合酶为1.25 U、dNTPs 为2 µL，dd H2O 14.5 µL，建立的扩增程序：94℃预变性5 min，开始34个循环；94℃变性30 s，后据不同退火温度的引物复性45 s，72℃延伸2 min，循环结束后72℃延伸7 min。本研究筛选出红芪扩增的引物17条；PCR反应产物电泳时间为120 min，最佳循环数为34，建立了稳定的体系，为进一步研究红芪的遗传多样性及遗传结构提供了帮助。