烟草中RNA基因沉默抑制子HC-Pro的表达及鉴定

利用农杆菌介导的叶盘转化法进行的烟草（Nicotiana benthamiana L.）遗传转化技术已经被广泛应用。蚜传辅助因子(helper component-proteinase, HC-Pro)是一种RNA沉默抑制子，为了研究HC-Pro蛋白的功能，本文采用农杆菌介导的烟草（Nicotiana benthamiana L.）叶盘转化法将外源基因HC-Pro转化烟草。并优化了农杆菌重悬液的浓度，选择培养基中卡那霉素的浓度和生根培养基中活性炭的比例。此外，本文介绍了一种简单而有效的生根技术—水培生根法，并利用这种技术快速获得了HC-Pro转基因株系。半定量RT-PCR（Reverse transcription-PCR）检测结果表明，HC-Pro在转基因烟草及转基因后代植株中稳定表达。